МИКОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
, комплекс методов,
применяемых в н.-и. и диагностич. лабораториях для выяснения роли грибов в этиологии болезней животных.
Микологическое исследование при диагностике микозов включает микроскопию патол.
материала для обнаружения возбудителя в органах и тканях больного животного,
выделение чистой культуры и её [ее] идентификацию. В неясных случаях проверяют патогенность выделенных культур биол.
пробой. Дополнительно используют серологич.,
аллергич.,
люминесцентный методы диагностики.
Отбор патол. материала при дерматомикозах производят с периферии свежих,
поражённых [пораженных] очагов (корочки и волосы); при эпизоодич. лимфангите,
споротрихозе,
актиномикозе стерильно извлекают гной из невскрывшихся абсцессов; при кандидамикозе,
аспергиллёзе [аспергиллезе] и др. висцеральных микозах берут соскобы с наложений на слизистых оболочках,
а также кусочки поражённых [пораженных] внутренних органов. Патол. материал помещают в стерильные чашки Петри,
Для лучшего выявления элементов грибов из патол. материала готовят препараты на предметном стекле в капле 10—20%-ного р-ра едкого натра с добавлением 50% -ного водного р-ра глицерина.
Микроскопируют неокрашенные препараты (реже окрашенные по Граму) при малом увеличении,
затем при X 400 или X 600. Первичную культуру возбудителей получают посевом патол.
материала на агар Сабуро,
МПА с глюкозой,
кровяной,
печёночный [печеночный],
сусло-агар (10—12 пробирок). При значит. загрязнении посторонней микрофлорой можно применить предпосевную обработку патол.
материала или добавить антибиотики в питат. среду. Оптимальный рН питат.
сред для патогенных грибов составляет 6,0—7,2,
темп-pa культивирования 26—30°С,
для отдельных представителей 37°С. Посевы выдерживают до 30 сут,
т. к. первичные культуры чаще развиваются медленно. Детальное изучение культурально-морфологич.
признаков,
ферментативной активности и определение вида гриба проводят гл.
обр. на спец. средах. Патогенность культур проверяют заражением белых мышей,
морских свинок,
кроликов,
хомяков через скарифицированную кожу,
подкожно,
интраперитониально,
внутривенно,
ингаляционным методом. Серологич. реакции (РСК,
преципитации,
агглютинации),
аллергич. внутрикожные пробы применяют в комплексе с др. методами при диагностике преим.
кандидамикоза,
гистоплазмоза,
эпизоотич. лимфангита. Люминесцентным методом выявляют у животных микроспорию.
Для микологического исследования при диагностике микотоксикозов берут ср.
пробы из партий кормов,
вызвавших алиментарное отравление животных. Предварительно исключают инфекц.
болезни,
отравления ядовитыми растениями и ядохимикатами. М. и. состоит из органолептич.,
микроскопич. анализов корма,
выявления микофлоры и идентификации выделенных культур грибов.
Используют биол. и физико-химич. методы исследования кормов и культур грибов на токсичность.
При органолептич. анализе учитывают влажность,
цвет,
запах,
налёты [налеты] спороношений грибов (нередко корма,
поражённые [пораженные] токсичными грибами,
не отличаются по внешнему виду от доброкачественных). Для выявления поверхностной микофлоры зерно высевают в чашки Петри на агар Чапека.
Глубинное поражение зерна грибами определяют после предварит.
обработки его р-ром сулемы 1 : 1000,
3%-ным р-ром формальдегида с последующей про мывкой стерильной водой (для нейтрализации р-ра формальдегида добавляют каплю 5%-ного р-ра аммиака).
Затем зерно (10—15 шт.) раскладывают на агар Чапека в чашки Петри.
При выделении грибов из муки,
отрубей,
комбикорма пользуются гл. обр. методом разливки. Взвесь корма (10 г на 100 мл стерильной воды) встряхивают в шуттель-аппарате и по 1 мл взвеси дальнейшего разведения (1 : 1000—10000) распределяют по поверхности агара Чапека на 8—10 чашек Петри.
Грубые корма (сено,
солома) высевают в чашки Петри на фильтровальную бумагу,
увлажнённую [увлажненную] стерильным р-ром Ван Итерсона. Посевы кормов выдерживают 7—10 сут при t 22,
26°С. На 3—5-е сут ориентировочно определяют микофлору просмотром колоний грибов на месте роста и микроскопией в капле стерильной воды или физиол.
р-ра. По частоте обнаружения колоний отдельных видов грибов можно приближённо [приближенно] судить о степени поражённости [пораженности] корма.
При посеве методом разливки нагрузку диаспор на 1 г корма учитывают более точно.
Из колоний делают отсевы на агар Чапека в пробирки для получения чистых культур грибов и определения их вида.
Выделение токсичных вариантов грибов из исследуемых образцов корма — решающий момент в диагностике микотоксикозов.
Токсичность образцов корма и культур грибов определяют кожной реакцией на кролике и скармливанием лабораторным животным.
Для выявления в кормах и культурах грибов афлатоксинов и зеараленона (Fз) применяют метод тонкослойной хроматографии на силикагеле в сочетании с люминесцентным анализом.
Лит.: Саркисов А. X. [и др.],
Диагностика грибных болезней (микозов и микотоксикозов) животных,
М.,
1971; Курасова В. В.,
Костин В. В.,
Малиновская Л. С.,
Методы исследования в ветеринарной микологии,
М.,
1971.
|
