МИКРОСКОПИЯ
, исследования невидимых невооружённым [невооруженным] глазом объектов при помощи микроскопа.
Различают световую М.,
основанную на использовании световых лучей,
и электронную М.,
где вместо световых лучей применяют поток электронов (см. Электронный микроскоп).
Световая М. подразделяется на обычную,
фазово-контрастную,
аyопт-ральную,
интерференционную,
поляризационную,
люминесцентную,
ультрафиолетовую (см. Микроскоп
). Непосредственной М. в световом микроскопе предшествует установление освещения (см. Микроскопическая техника
).
В биол.исследованиях производят М. как живых,
так и убитых микрообъектов. Исследование живых бактерий,
простейших,
клеток макроорганизма проводят в проходящем и отражённом [отраженном] свете.
В первом случае изучают прозрачные объекты,
приготовляя т. н. “влажные” препараты или выращивая микроколонии бактерий на тонком слое питательного агара.
Примерами “влажного” препарата служат раздавленная капля
и висячая капля
.
Более чёткие [четкие] результаты прижизненного наблюдения получают при выращивании микробов в Ш-образной камере Пешкова или масляной камере Фонбрюна.
За микрокультурой можно вести непрерывное наблюдение,
используя вместо обычного столика нагревательный или спец. инвертированные микроскопы (типа МБИ-12 и МБИ-13) с термостатом и кинокамерами.
В отражённом [отраженном] свете исследуют непрозрачные объекты. Для повышения контрастности микрообъектов используют косое освещение,
аноптральные объективы,
темнопольные и фазово-контрастные устройства. Для получения дополнит.
сведений о толщине,
показателях преломления и двойного лучепреломления,
содержании сухой массы в клетках,
светопропускаемости и др. физич. величинах объекта используют интерференционно-поляризационную М.
Прижизненное флюорохромирование микроорганизмов сильно разбавленными р-рами красителей акридинового ряда позволяет производить наблюдения за физиологией клеток с помощью люминесцентного микроскопа,
заключение бактерий в спец. камеру с инертным газом — исследовать живые клетки при помощи электронной М.
Чаще микрообъекты микроскопируют в неживом состоянии,
изготовляя препараты или срезы. При использовании светлопольной М.
препараты в виде тонкого мазка или среза окрашивают р-рами спец.
красителей. Для иммунофлюоресцентного исследования препараты обрабатывают сыворотками,
мечеными флюорохромами.
Для электронной М. биол. материалы предварительно контрастируют веществами,
интенсивно рассеивающими электроны. Для контрастирования в процессе фиксации липидов и белков используют четырёхокись [четырехокись] осмия,
для фосфолипидов — перманганат калия,
для соединений,
содержащих углеводы,— Рутений красный. В момент фиксации и обезвоживания препараты окрашивают также уранилацетатом и фосфорновольфрамовой к-той.
Эффективнее контрастировать материал после изготовления ультратонких срезов.
Для изучения тон-Ной структуры частиц (но не тонких срезов материала) используют также негативное окрашивание (водным р-ром фосфорновольфрамового натрия или урановой соли муравьиной к-ты),
создающее вокруг объекта тёмный [темный] фон. Для контрастирования объектов их напыляют тяжёлым [тяжелым] металлом или готовят из него реплики (отпечатки).
В случае иммунохимич. исследования на уровне электронной М. объект предварительно обрабатывают антителами,
конъюгированными с ферритином,
диазофенилмеркуриацетатом,
пероксидазой или йодом.
Микроскопия вирусов (вирусоскопия).
Морфологию вирусов изучают след.
методами электронной микроскопии: ультратонких срезов,
негативного контрастирования и оттенения металлами. Метод ультратонких срезов позволяет установить строение вируса на срезе,
тип его нуклеиновой к-ты,
способ проникновения в клетку и выхода из неё [нее],
а также место размножения в клетке. Метод негативного контрастирования даёт [дает] высокое разрешение и позволяет изучить форму и размеры вирионов,
структурную организацию их оболочек. Используя антитела,
определяют локализацию антигенных детерминант в структуре вируса.
Для негативного контрастирования используют очищенные и концентрированные препараты вирусов.
Из контрастирующих веществ чаще применяют соли фосфорновольфрамовой и кремнийвольфрамовой к-т.
Метод оттенения металлами (золотом,
платиной и др.),
испарением их в вакууме позволяет установить размеры и форму вирусов,
используя длину полученной тени и угол,
под к-рым велось оттенение. Существенный недостаток метода оттенения — значительно меньшее разрешение деталей структуры вируса,
чем при методе негативного контрастирования.
Под термином “вирусоскопия” всё [все] чаще стали понимать совокупность методов,
с помощью к-рых выявляют вирусов в биол. материале и изучают их морфологию.
См. также Вирусологические исследования
.
Лит.: Ромейс Б.,
Микроскопическая техника,
пер. с нем.,
М.,
1954; Уикли Б. С.,
Электронная микроскопия для начинающих,
пер. с англ.,
М.,
1975; Киселев Н. А.,
Электронная микроскопия биологических макромолекул,
М.,
1965.
|
