ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
, комплекс методов исследования,
позволяющих распознать этиологию вирусного заболевания и изучить его возбудителя.
Осн. этапами В. и. являются выделение вируса от больных и павших животных (взятие,
консервирование,
пересылка и подготовка материала,
заражение им животных,
куриных эмбрионов,
культуры клеток); титрование вирусов для определения их кол-ва в исследуемых материалах; культивирование вирусов на восприимчивых домашних и лабораторных животных,
особенно на развивающихся куриных эмбрионах и культурах тканей (гл.
обр. первичнотрипсинизированных).
С помощью морфологич. методов выявляют элементарные тельца,
внутриклеточные включения (напр.,
Бабеша — Негри при бешенстве,
Боллингера при оспе птиц). Иммунохимич. методы (гл. обр. метод флуоресцирующих антител) позволяют определить специфич.
вирусный антиген в заражённых [зараженных] клетках тканевой культуры или органов и тканей инфицир.
животных. С помощью серологич. методов проводят видовую и группоспецифич.
идентификацию вируса и антител в сыворотках переболевших животных.
С этой целью используют реакции нейтрализации,
РСК,
реакцию гемагглютинации,
задержки гемагглютинации,
диффузионной преципитации,
торможения гемадсорбции. Реакция нейтрализации позволяет улавливать антигенные различия сходных между собой вирусов даже в пределах одноимённой [одноименной] группы.
РСК применяют для обнаружения вирусных антигенов в материалах от больных и павших животных,
идентификации выделенного вируса,
изучения антигенных связей между различными вирусами и определения антител у переболевших животных.
Реакции гемагглютинации и задержки гемагглютинации широко применяют в В.
и. для диагностич. целей и типирования возбудителей болезни Ньюкасла,
гриппа птиц,
парагриппа и нек-рых аденовирусов; непрямую реакцию гемагглютинации используют для выявления адено- и миксовирусов,
хламидий. Реакцией прицепитации в агаре изучают антигенную структуру вирусов,
выявляют антитела в сыворотке и антигены в исследуемом материале.
Реакцию гемадсорбции применяют для предварительной индикации и титрования вирусов в культуре клеток,
особенно тех,
к-рые не вызывают цитопатич. действия. Гемадсорбция наступает раньше проявления цитопатогенного действия,
поэтому её [ее] используют как ранний метод предварительной индикации вирусов.
Гемадсорбция островковая (адсорбция эритроцитов на отдельных участках монослоя клеток) типична для гриппа свиней,
эпидемич. паротита; диффузная (адсорбция эритроцитов на клетках всего монослоя)— для классич.
чумы кур,
болезни Ньюкасла,
афр. чумы свиней и др. Методы очистки и концентрации вирусов используют при изучении физич.,
химич. и морфологич. свойств вирусов. Фазовые системы,
образованные полимерами, используют для концентрации вирусов из больших объёмов [объемов] вируссодержащих жидкостей,
выделения нуклеиновых к-т вирусов. Радиобиологич. методы применяют в В.
и. для изучения распределения и локализации вирусов (антител) в организме и особенно для изучения процессов онтогенеза вирусов.
С помощью электронной микроскопии обнаруживают вирионы в исследуемом материале и специфич.
конгломераты вирусов и антител (иммунная электронная микроскопия).
Иммуноэлектроосмофорез обусловлен одновременным встречным движением в геле агара антигена и антитела в результате разной величины электрич.
заряда с образованием комплекса антиген — антитело в виде линии преципитации и последующей его денатурацией.
Метод применяют при изучении антигенной структуры вируса. Изоэлектрич.
фокусирование основано на способности белков переходить в инертное (в отношении электрофоретич.
подвижности),
а затем агрегированное состояние в изоэлектрич. точке. Метод применяют для изучения белков вирусов.
При иммуноферментативном методе происходит присоединение фермента к антителам с последующим образованием комплекса фермент — антитело — антиген,
к-рый выявляют в клетке с помощью цитохимич. реакции на фермент (пероксидазу,
щелочную и кислую фосфотазу,
глюкозооксидазу). Метод используют с диагностич. целью для выявления вирусных антигенов в культурах клеток,
мазках-отпечатках,
криостатных срезах,
а также для изучения тонкой структуры антигенов вируса,
патогенеза вирусных болезней и др. См. также Вирусоскопия
.
Лит.: Тихоненко Т. И.,
Методические основы биохимии вирусов,
М.,
1973,
с. 152—58; Лабораторная диагностика вирусных и риккетсиозных заболеваний,
пер. с англ.,
ред. Э. Леннет и Н. Шмидт,
М.,
1974.
|
